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发布时间：2025-01-10
文章来源：瑞迪生物
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1. 特殊情况下的样本的处理
关于高脂样本：高脂样本含有脂肪，不是均质溶液，若直接上样会影响抗原抗体的结合，测值不准确。建议先大转速5000×g离心，静置10min后取中层较澄清液体，再用大转速(≥5000×g)离心一次取中下层清液用于检测。
关于溶血样本：样本溶血后，内源性HRP酶以及血红蛋白的类HRP性能会导致ELISA出现不可控的非特异性着色，从而影响检测结果的准确性。如果样本轻微溶血，在浓度范围允许的情况下，可以对样本进行稀释检测以减少其影响或者是进行离心取上清。如果溶血严重建议重新收集样本。
2. 需要破碎的样本处理方式
细胞提取液：：贴壁细胞用冷的1×PBS轻轻清洗，然后用胰蛋白酶消化， 1000×g 离心 5分钟后收集细胞；悬浮细胞可直接离心收集。收集的细 胞用冷的1×PBS洗涤3次。每106个细胞中加入150-200μL 1×PBS重悬(推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂；若含量很低可减少PBS的体积)并通 过反复冻融或超声使细胞破碎。将提取液于2-8℃，1500×g离心10分钟，取上清检测。
组织匀浆：用预冷的PBS(0.01M,pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液， 称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重 量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入 玻璃匀浆器中，在冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对 匀浆液进行反复冻融或超声破碎。最后将匀浆液于2-8℃，5000×g离心5-10分钟，取上清检测。
粪便：将粪便以9mL/g的比例添加PBS缓冲液(0.01M, pH=7.4；可选择性添加0.05M EDTA)，冰上震荡15分钟，后于2-8℃， 5000×g离心5-10分钟，取上清检测。
爪组织：对动物进行麻醉，需要去除指甲等角质层，只取用指甲下方的皮肤和软组织部分，将这部分组织进行处理，处理方式同组织匀浆！
PMSF试剂：以10mg/mL的浓度储存，其有效浓度为17~174μg/mL，按照有效浓度进行配置。组织匀浆需要严格按照1:9的比例，则需要17~177微升的PMSF量。细胞提取液如果是按照150-200μL PBS重悬，则是需要3-35μL的PMSF量，这里建议是按照150μL/1.5μL或者200μL/2.0μL的量去给，便于实验操作！
3. 类似于细胞上清的样本的处理方式
尿液：采集尿液样本，一般为早晨的中段晨尿，加入无菌试管中；将采集样本于2-8℃，1000×g离心15-20分钟，除去杂质及细胞碎片。取上清检测。
唾液：提前1小时禁食并漱口保持口腔干净，采样前半小时不喝水不刷牙。在2-8℃下，4000×g离心10分钟以去除杂质，取上清即可检测。建议使用新鲜的唾液样本检测。
骨髓液：建议用抗凝管抗凝并静置，30min于2-8℃，1000×g离心15分钟，取上清液检测。骨髓液建议抽取后直接处理并检测，不能即刻检测需将离心后的上清液冻存。骨髓是重要的造血组织，未处理的样本直接冻融后会有溶血现象，不适用ELISA检测。
肺泡灌洗液：10%水合氯醛溶液，腹腔麻醉；打开腹腔，另取10mL注射器行下腔静脉采血，尽可能将血放尽；在冰面上对左肺进行肺灌洗。取37℃生理盐水5mL，分三次灌洗：2mL、1.5mL、1.5mL灌洗。回收率在70%以上；将肺泡灌洗液用离心机4℃，1000×g离心10min，取上清检测。
关节液：使用无菌注射器和针头穿刺关节腔，轻轻抽取关节液。将采集的生物体液用离心机4℃，1000×g离心20分钟，取上清检测。
腹水：使用无菌注射器和针头穿刺腹腔，抽取腹水。将采集的生物体液用离心机4℃，1000×g离心20分钟，取上清检测。
脑脊液：将取材对象进行麻醉，使用无菌针头穿刺脊髓腔或脑室，缓慢抽取脑脊液。使用无菌容器收集。将采集的生物体液用离心机4℃，1000×g离心20分钟，取上清检测。
鼻腔灌洗液：使用PBS(0.01M,pH=7.4)通过无菌注射器将溶液注入鼻腔。鼻腔灌洗液通过鼻腔被回收，使用无菌容器收集。将采集的生物体液用离心机4℃，1000×g离心20分钟，取上清检测。
痰液：选择痰液中较为粘稠部分称重，加两倍于痰量的 0.1% DTT(二硫苏糖醇)， DTT 的主要作用是溶解粘液，用吸管反复吹打，漩涡器振荡15S，37℃恒温水浴振荡5分钟；加入两倍于痰量的PBS(0.01M,pH=7.4)继续振荡15-20分钟，150目的金属丝网过滤，1500 rpm 离心10分钟，取上清检测。
前列腺液：前例腺液有看两种取材方法，经直肠按摩法和前列腺穿刺法，经直肠按摩法首先对取材对象麻醉，操作者佩戴无菌手套，消毒肛门周围区域，然后通过肛门进入直肠。通过直肠，操作者可以触及到前列腺。用指尖轻轻按摩前列腺，促进前列腺液的分泌。按摩时可以沿前列腺两侧向中线挤压，帮助释放前列腺液。按摩过程中，前列腺液会自然流出，通过无菌的棉签、管子或针头收集前列腺液。将采集的生物体液用离心机4℃，1000×g离心20分钟，取上清检测。前列腺穿刺法首先对取材对象麻醉，使用无菌穿刺针从前列腺分泌腺体中直接抽取液体。穿刺部位通常为前列腺的下极或其他容易接近的区域。将穿刺得到的前列腺液转移至无菌容器中。将采集的生物体液用离心机4℃，1000×g离心20分钟，取上清检测。取样后，需对穿刺部位进行止血处理，并确保取材对象得到适当的护理。
精液：精液采集前应保持2-7天的禁欲期，以确保精液质量和数量在标准范围内。精液应直接收集于无菌容器中。正常精液射出体外呈稠厚的胶冻状，射出体外后需在室温或37℃水浴箱中使前列腺分泌的纤维蛋白溶解酶作用下液化变的稀薄。待精液完全液化后，将精液4000rpm离心10分钟分离精浆进行检测。
卵泡液：将取材对象麻醉，用超声探头确定卵巢中的卵泡位置，选择适合采集的成熟卵泡。使用细长针头穿刺卵泡，针头的尖端会插入卵泡内；通过注射器或真空吸引管吸取卵泡内的液体。每个成熟卵泡通常会有一定量的卵泡液。将从卵泡中吸取的液体转移到无菌管中。将采集的生物体液用离心机4℃，1000×g离心20分钟，取上清检测。
阴道分泌物：对取材对象（需要注意取样时间）使用合适的器具（如棉签、采样棒）收集分泌物，并将其放入无菌管中。将采集的生物体液用离心机4℃，1000×g离心20分钟，取上清检测。
乳汁：通过手动按摩乳房，用手挤压乳头，收集乳汁。应注意手部卫生，操作时避免感染。也可以使用电动或手动吸奶器，通常用于长时间采集或分泌量较大的情况。吸奶器需确保是干净且无菌的。将采集的生物体液用离心机4℃，1000×g离心20分钟，取上清检测。请注意取材对象的生理状态以及取样时间！
房水：使用无菌注射器通过穿刺取材对象的眼球的前房，采集房水。将房水样本收集于无菌容器中。将采集的生物体液用离心机4℃，1000×g离心20分钟，取上清检测。
泪液：通常通过刺激泪腺分泌泪液进行采集。常见的方法是使用刺激性眼药水，如生理盐水、氯化钠等，轻轻滴入眼睛，或使用刺激性物质（如眼部轻微按摩）来促进泪腺分泌。使用吸管直接收集眼角流出的泪液，收集于无菌容器中。将采集的生物体液用离心机4℃，1000×g离心20分钟，取上清检测。
支气管液：对取材对象麻醉，通过患者的鼻腔或口腔插入支气管镜，支气管镜沿着气道进入肺部，直到到达肺部的末梢小气道。将一定量的生理盐水（通常为10-30mL）缓慢注入肺部的某个部位（如支气管、肺泡区域）。这会冲洗该部位的肺泡和支气管，将其内的细胞、微生物、分泌物等物质带回气道。灌注的液体会被吸回支气管镜中，收集的液体即为支气管液。为了获得更多的支气管液，可多次灌注和回收。将支气管液收集于无菌容器中。采集的生物体液用离心机4℃，1000×g离心20分钟，取上清检测。