产品名称 | Mouse HAase(Hyaluronidase) ELISA Kit | 反应种属 | Mouse |
Uniprot ID | Q91ZJ9 | 别称 | Hyaluronic Lase |
检测方法 | 双抗体夹心法 | 灵敏度 | 2.35 ng/mL |
标准品 | 250ng/mL | 检测范围 | 3.91-250ng/mL |
样品类型 | Serum, Plasma, Tissue homogenate and Other biological samples;Sample Volume=100μL | ||
检测时间 | 3.5小时 | 研究领域 | Cytokine;Tumor immunity;Infection immunity; |
测试原理 | 本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗小鼠HAase抗体包被于酶标板上,实验时样品或标准品中的小鼠HAase会与包被抗体结合,游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗小鼠HAase抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗小鼠HAase抗体与结合在包被抗体上的小鼠HAase结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物,游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB),TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色,加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值,小鼠HAase浓度与OD450值之间呈正比,通过绘制标准曲线计算出样品中小鼠HAase的浓度。 |
由于实验操作条件的不同(如操作者、移液技术、洗板技术和稳定条件等),标准曲线的OD值会有所差异。以下数据和曲线仅供参考,实验者需根据自己的实验建立标准曲线。
(ng/mL) | OD | Corrected |
---|---|---|
250.00 | 2.327 | 2.284 |
125.00 | 1.533 | 1.490 |
62.50 | 0.902 | 0.859 |
31.25 | 0.419 | 0.376 |
15.63 | 0.240 | 0.197 |
7.82 | 0.140 | 0.097 |
3.91 | 0.085 | 0.042 |
0.00 | 0.043 | 0.000 |
板内精密度:低浓度样本,中浓度样本和高浓度样本分别在1块板子上检测20次。
板间精密度:低浓度样本,中浓度样本和高浓度样本分别在3块板子上检测20次。
Intra-assay Precision | Inter-assay Precision | |||||
---|---|---|---|---|---|---|
Sample | 1 | 2 | 3 | 1 | 2 | 3 |
n | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 |
Mean(ng/mL) | 7.71 | 52.93 | 90.86 | 4.78 | 36.26 | 65.58 |
Standard deviation | 0.36 | 1.95 | 5.92 | 0.40 | 1.93 | 5.46 |
C V (%) | 4.62 | 5.52 | 2.87 | 5.89 | 2.84 | 3.11 |
分别往5个不同样本中添加已知浓度的目标蛋白,做回收实验,得出回收率范围和平均回收率。
Sample Type | Range(%) | Average Recovery(%) |
---|---|---|
Serum (n=8) | 90-105 | 97 |
EDTA plasma (n=8) | 85-97 | 91 |
Cell culture media (n=8) | 81-95 | 88 |
分别往5个样本中添加已知浓度的目标蛋白,做回收实验,得出回收率范围及平均回收率。将5个样本分别稀释2倍,4倍,8倍,16倍做回收实验,得出回收率范围及平均回收率。
Serum (n=5) | EDTA plasma (n=5) | Cell culture media (n=5) | ||
---|---|---|---|---|
1:2 | Range (%) | 85-94 | 95-102 | 85-92 |
Average (%) | 85 | 100 | 90 | |
1:4 | Range (%) | 92-101 | 95-102 | 88-102 |
Average (%) | 97 | 101 | 90 | |
1:8 | Range (%) | 87-96 | 97-105 | 86-92 |
Average (%) | 96 | 97 | 87 | |
1:16 | Range (%) | 82-90 | 92-101 | 91-103 |
Average (%) | 90 | 97 | 97 |