技术专栏

1、在进行ELISA实验前，制备血浆样本可以使用哪些抗凝剂？

 

在制备血浆时，可以使用EDTA盐抗凝剂，我们推荐EDTA2Na，浓度为1.5–2.2 mg/mL 血液，采血管预装量通常在 4.5 mL 血 + 7.2 mg EDTA2Na（即 1.6 mg/mL，适用于大多数检测）。也可以使用市面上其它的抗凝剂如肝素盐、柠檬酸盐等。以上盐通常为钠盐或者钾盐。若还需要进行生化/酶学检测，需预实验验证抗凝剂兼容性。

 

2、如何制备血浆？

使用含抗凝剂的采血管收集样品，样品收集后30分钟内于2-8℃，1000×g 离心 15分钟，取上清检测。

 

3、采血管如何选择？

 

在 ELISA 检测中，血清与血浆是应用最为广泛的样本类型。样本类型的差异、前处理方式及采血管的选择等，均会直接影响检测结果的准确性、稳定性与重复性。本文围绕血清与血浆的关键区别，介绍不同采血管的选择原则。

 

血清是血液凝固后，在血浆中除去纤维蛋白原分离出的淡黄色透明液体。

血清的采集与处理：真空采血针采集新鲜血液，加入无菌试管中；采血后室温静置1h或2-8℃过夜，后用离心机2-8℃，1000×g离心20min，取上清检测。

 

血浆是血液的重要组成部分，呈淡黄色液体(因含有胆红素)。

血浆的采集与处理：真空采血针采集新鲜血液，加入无菌试管中；按1:9加入抗凝剂（抗凝剂推荐使用EDTA-Na2），30分钟内分离血浆或直接用抗凝管采集；采血后离心机2-8℃，1000×g离心15min，取上清检测。

 

 

4℃，可放置保存一周；
-20℃，可放置保存1个月；
-80℃，可放置保存3个月。

 

ELISA 检测常用的采血管类型主要包括无添加剂红管、促凝剂黄管、EDTA 紫管、肝素绿管、枸橼酸钠蓝管及血沉黑管等。

红管：不含任何添加剂，适用于常规生化血清检测。

黄管：促凝管，添加有促凝剂和惰性分离胶，标本离心后，分离胶使血液中的血清和血细胞彻底分开，采集后需颠倒混匀8次，适用于急诊血清生化检测。

紫管：含EDTA-盐的抗凝管，采集后需颠倒混匀8次或弹拨混匀，一般适用于常规的血液学检测， 如血常规、血型、糖化血红蛋白等。

绿管：也叫肝素管，肝素直接具有抗凝血酶的作用，可延长标本凝血时间，一般适用于常规生化和急诊血浆检测。

蓝管：枸橼酸钠管，抗凝比例（即血液：抗凝剂）严格 1:9，采集后立即颠倒混匀8次，适用于凝血功能（PT、APTT、纤维蛋白原等）检测。

黑管：血沉管，一般用于凝血机制检测，抗凝比例 1:4，采集后需颠倒混匀8次。

通常情况下，ELISA检测中，血清样本建议选红管，黄管或橙管，血浆样本建议选择紫管和绿管。合理选择采血管，是保证样本质量、提升 ELISA 检测结果准确性与可靠性的关键环节。