技术专栏

一、贴壁细胞的传代所需材料 · 装有贴壁细胞的培养容器 · 经过组织培养处理的培养瓶、培养板或培养皿 · 完全生长培养基，预热至 37℃ · 一次性无菌15ml试管 · 37℃ 培养箱，充有二氧化碳浓度为 5% 的湿化空气 · 平衡盐溶液，例如：杜尔贝科磷酸盐缓冲液 (DPBS)，不含钙、镁和酚红 · 消化酶，例如：胰蛋白酶，不含酚红 二、贴壁细胞传代流程 细胞培养一定要保持工作区的无菌清洁，先用紫外灯和臭氧杀菌1h，然后通风3

一、WB结果中背景较高 1. 如果出现均一性高背景，可能从抗体、实验操作和缓冲液三方面寻找原因： （1）抗体相关 一抗、二抗浓度较高，应选择最适宜的抗体稀释度，优化稀释条件；或者一抗孵育的温度偏高，建议4℃过夜孵育。 抗体储存时间较长或储存条件不佳导致抗体失活：宜选择新的抗体。 （2）实验操作相关 检测时曝光时间过长，可减少曝光时间； 膜封闭不够，宜优化封闭的时间和温度、选择合适的封闭液； 膜的选择有问题：实验过程中要注意保持膜的湿润，使用镊子夹取膜； 孵育中洗膜不充分：适当增加洗膜时间和次数；确保在充分震荡的条件下孵育膜，并且抗体充分覆盖