产品名称 | Human C4(Complement Component 4) ELISA Kit | 反应种属 | Human |
Uniprot ID | P0C0L4(C4A)&P0C0L5(C4B) | 别称 | C4 |
检测方法 | 双抗体夹心法 | 灵敏度 | 1.88 ng/mL |
标准品 | 200ng/mL | 检测范围 | 3.13-200ng/mL |
样品类型 | Serum, Plasma, Tissue homogenate and Other biological samples;Sample Volume=100μL | ||
检测时间 | 3.5小时 | 研究领域 | Signal transduction; |
测试原理 | 本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗人C4抗体包被于酶标板上,实验时样品或标准品中的人C4会与包被抗体结合,游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人C4抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗人C4抗体与结合在包被抗体上的人C4结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物,游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB),TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色,加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值,人C4浓度与OD450值之间呈正比,通过绘制标准曲线计算出样品中人C4的浓度。 |
由于实验操作条件的不同(如操作者、移液技术、洗板技术和稳定条件等),标准曲线的OD值会有所差异。以下数据和曲线仅供参考,实验者需根据自己的实验建立标准曲线。
(ng/mL) | OD | Corrected |
---|---|---|
200.00 | 2.328 | 2.284 |
100.00 | 1.534 | 1.490 |
50.00 | 0.903 | 0.859 |
25.00 | 0.420 | 0.376 |
12.50 | 0.241 | 0.197 |
6.25 | 0.141 | 0.097 |
3.13 | 0.094 | 0.050 |
0.00 | 0.044 | 0.000 |
板内精密度:低浓度样本,中浓度样本和高浓度样本分别在1块板子上检测20次。
板间精密度:低浓度样本,中浓度样本和高浓度样本分别在3块板子上检测20次。
Intra-assay Precision | Inter-assay Precision | |||||
---|---|---|---|---|---|---|
Sample | 1 | 2 | 3 | 1 | 2 | 3 |
n | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 |
Mean(ng/mL) | 4.53 | 37.13 | 54.77 | 5.32 | 31.51 | 55.53 |
Standard deviation | 0.24 | 2.48 | 4.46 | 0.22 | 2.26 | 4.45 |
C V (%) | 5.80 | 7.09 | 4.98 | 5.68 | 4.88 | 5.14 |
分别往5个不同样本中添加已知浓度的目标蛋白,做回收实验,得出回收率范围和平均回收率。
Sample Type | Range(%) | Average Recovery(%) |
---|---|---|
Serum (n=8) | 88-106 | 97 |
EDTA plasma (n=8) | 87-99 | 93 |
Cell culture media (n=8) | 82-97 | 90 |
分别往5个样本中添加已知浓度的目标蛋白,做回收实验,得出回收率范围及平均回收率。将5个样本分别稀释2倍,4倍,8倍,16倍做回收实验,得出回收率范围及平均回收率。
Serum (n=5) | EDTA plasma (n=5) | Cell culture media (n=5) | ||
---|---|---|---|---|
1:2 | Range (%) | 92-106 | 95-103 | 80-96 |
Average (%) | 98 | 102 | 96 | |
1:4 | Range (%) | 93-105 | 95-103 | 88-97 |
Average (%) | 100 | 101 | 93 | |
1:8 | Range (%) | 85-99 | 87-98 | 96-103 |
Average (%) | 97 | 96 | 99 | |
1:16 | Range (%) | 90-99 | 85-92 | 86-92 |
Average (%) | 97 | 90 | 90 |