产品名称 | Human IgA(Immunoglobulin A) ELISA Kit | 反应种属 | Human |
Uniprot ID | P01876(IGHA1) | 别称 | IgA; Immunoglobulin A |
检测方法 | 双抗体夹心法 | 灵敏度 | 0.62 ng/mL |
标准品 | 50ng/mL | 检测范围 | 0.78-50ng/mL |
样品类型 | Serum, saliva, colostrum, Gastrointestinal secretions;Sample Volume=100μL | ||
检测时间 | 3.5小时 | 研究领域 | Enzyme & Kinase; |
测试原理 | 本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗人IgA抗体包被于酶标板上,实验时样品或标准品中的人IgA会与包被抗体结合,游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人IgA抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗人IgA抗体与结合在包被抗体上的人IgA结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物,游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB),TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色,加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值,人IgA浓度与OD450值之间呈正比,通过绘制标准曲线计算出样品中人IgA的浓度。 |
由于实验操作条件的不同(如操作者、移液技术、洗板技术和稳定条件等),标准曲线的OD值会有所差异。以下数据和曲线仅供参考,实验者需根据自己的实验建立标准曲线。
(ng/mL) | OD | Corrected |
---|---|---|
50.00 | 2.335 | 2.311 |
25.00 | 1.533 | 1.509 |
12.50 | 0.930 | 0.906 |
6.25 | 0.498 | 0.474 |
3.13 | 0.243 | 0.219 |
1.57 | 0.128 | 0.104 |
0.78 | 0.067 | 0.043 |
0.00 | 0.024 | 0.000 |
板内精密度:低浓度样本,中浓度样本和高浓度样本分别在1块板子上检测20次。
板间精密度:低浓度样本,中浓度样本和高浓度样本分别在3块板子上检测20次。
Intra-assay Precision | Inter-assay Precision | |||||
---|---|---|---|---|---|---|
Sample | 1 | 2 | 3 | 1 | 2 | 3 |
n | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 |
Mean(ng/mL) | 2.58 | 21.16 | 32.19 | 2.83 | 20.38 | 34.78 |
Standard deviation | 0.12 | 1.15 | 1.27 | 0.11 | 1.15 | 2.12 |
C V (%) | 4.09 | 4.36 | 6.58 | 2.92 | 5.63 | 4.83 |
分别往5个不同样本中添加已知浓度的目标蛋白,做回收实验,得出回收率范围和平均回收率。
Sample Type | Range(%) | Average Recovery(%) |
---|---|---|
Serum (n=8) | 91-99 | 95 |
EDTA plasma (n=8) | 82-95 | 88 |
Cell culture media (n=8) | 83-98 | 91 |
分别往5个样本中添加已知浓度的目标蛋白,做回收实验,得出回收率范围及平均回收率。将5个样本分别稀释2倍,4倍,8倍,16倍做回收实验,得出回收率范围及平均回收率。
Serum (n=5) | EDTA plasma (n=5) | Cell culture media (n=5) | ||
---|---|---|---|---|
1:2 | Range (%) | 85-94 | 86-95 | 85-96 |
Average (%) | 90 | 87 | 96 | |
1:4 | Range (%) | 87-99 | 86-95 | 92-107 |
Average (%) | 94 | 93 | 106 | |
1:8 | Range (%) | 85-101 | 93-103 | 83-99 |
Average (%) | 89 | 100 | 84 | |
1:16 | Range (%) | 80-90 | 87-98 | 80-96 |
Average (%) | 80 | 94 | 96 |