产品名称 | Mouse IgE(Immunoglobulin E) ELISA Kit | 反应种属 | Mouse |
Uniprot ID | N/A | 别称 | IgE |
检测方法 | 双抗体夹心法 | 灵敏度 | 75 ng/mL |
标准品 | 8000ng/mL | 检测范围 | 125-8000ng/mL |
样品类型 | Serum, Plasma, Tissue homogenate and Other biological samples;Sample Volume=100μL | ||
检测时间 | 3.5小时 | 研究领域 | Cytokine;Infection immunity; |
测试原理 | 本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗小鼠IgE抗体包被于酶标板上,实验时样品或标准品中的小鼠IgE会与包被抗体结合,游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗小鼠IgE抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗小鼠IgE抗体与结合在包被抗体上的小鼠IgE结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物,游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB),TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色,加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值,小鼠IgE浓度与OD450值之间呈正比,通过绘制标准曲线计算出样品中小鼠IgE的浓度。 |
由于实验操作条件的不同(如操作者、移液技术、洗板技术和稳定条件等),标准曲线的OD值会有所差异。以下数据和曲线仅供参考,实验者需根据自己的实验建立标准曲线。
(ng/mL) | OD | Corrected |
---|---|---|
8000.00 | 2.453 | 2.418 |
4000.00 | 1.602 | 1.567 |
2000.00 | 0.960 | 0.925 |
1000.00 | 0.452 | 0.417 |
500.00 | 0.225 | 0.190 |
250.00 | 0.115 | 0.080 |
125.00 | 0.070 | 0.035 |
0.00 | 0.035 | 0.000 |
板内精密度:低浓度样本,中浓度样本和高浓度样本分别在1块板子上检测20次。
板间精密度:低浓度样本,中浓度样本和高浓度样本分别在3块板子上检测20次。
Intra-assay Precision | Inter-assay Precision | |||||
---|---|---|---|---|---|---|
Sample | 1 | 2 | 3 | 1 | 2 | 3 |
n | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 |
Mean(ng/mL) | 204.65 | 1023.13 | 2365.85 | 253.04 | 1818.27 | 3550.05 |
Standard deviation | 6.65 | 73.12 | 105.59 | 6.70 | 54.33 | 117.65 |
C V (%) | 2.88 | 7.32 | 4.03 | 4.47 | 2.70 | 4.89 |
分别往5个不同样本中添加已知浓度的目标蛋白,做回收实验,得出回收率范围和平均回收率。
Sample Type | Range(%) | Average Recovery(%) |
---|---|---|
Serum (n=8) | 80-95 | 86 |
EDTA plasma (n=8) | 94-105 | 98 |
Cell culture media (n=8) | 85-97 | 91 |
分别往5个样本中添加已知浓度的目标蛋白,做回收实验,得出回收率范围及平均回收率。将5个样本分别稀释2倍,4倍,8倍,16倍做回收实验,得出回收率范围及平均回收率。
Serum (n=5) | EDTA plasma (n=5) | Cell culture media (n=5) | ||
---|---|---|---|---|
1:2 | Range (%) | 95-104 | 83-95 | 86-102 |
Average (%) | 98 | 86 | 95 | |
1:4 | Range (%) | 93-105 | 88-102 | 87-103 |
Average (%) | 104 | 101 | 97 | |
1:8 | Range (%) | 82-101 | 85-97 | 85-101 |
Average (%) | 87 | 89 | 85 | |
1:16 | Range (%) | 91-103 | 80-92 | 81-99 |
Average (%) | 97 | 85 | 97 |