产品名称 | Mouse vWF(VonWillebrand Factor) ELISA Kit | 反应种属 | Mouse |
Uniprot ID | Q8CIZ8 | 别称 | F8VWF, VWD |
检测方法 | 双抗体夹心法 | 灵敏度 | 0.75 ng/mL |
标准品 | 80ng/mL | 检测范围 | 1.25-80ng/mL |
样品类型 | Plasma;Sample Volume=100μL | ||
检测时间 | 3.5小时 | 研究领域 | Infection immunity;Endocrinology;Hormone metabolism; |
测试原理 | 本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗小鼠VWF抗体包被于酶标板上,实验时样品或标准品中的小鼠VWF会与包被抗体结合,游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗小鼠VWF抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗小鼠VWF抗体与结合在包被抗体上的小鼠VWF结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物,游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB),TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色,加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值,小鼠VWF浓度与OD450值之间呈正比,通过绘制标准曲线计算出样品中小鼠VWF的浓度。 |
由于实验操作条件的不同(如操作者、移液技术、洗板技术和稳定条件等),标准曲线的OD值会有所差异。以下数据和曲线仅供参考,实验者需根据自己的实验建立标准曲线。
(ng/mL) | OD | Corrected |
---|---|---|
80.00 | 2.456 | 2.418 |
40.00 | 1.605 | 1.567 |
20.00 | 0.963 | 0.925 |
10.00 | 0.455 | 0.417 |
5.00 | 0.228 | 0.190 |
2.50 | 0.118 | 0.080 |
1.25 | 0.073 | 0.035 |
0.00 | 0.038 | 0.000 |
板内精密度:低浓度样本,中浓度样本和高浓度样本分别在1块板子上检测20次。
板间精密度:低浓度样本,中浓度样本和高浓度样本分别在3块板子上检测20次。
Intra-assay Precision | Inter-assay Precision | |||||
---|---|---|---|---|---|---|
Sample | 1 | 2 | 3 | 1 | 2 | 3 |
n | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 |
Mean(ng/mL) | 2.00 | 19.92 | 36.18 | 2.50 | 11.40 | 29.86 |
Standard deviation | 0.06 | 0.82 | 1.53 | 0.09 | 0.63 | 1.22 |
C V (%) | 4.03 | 2.58 | 3.76 | 5.52 | 7.60 | 3.79 |
分别往5个不同样本中添加已知浓度的目标蛋白,做回收实验,得出回收率范围和平均回收率。
Sample Type | Range(%) | Average Recovery(%) |
---|---|---|
Serum (n=8) | 90-105 | 97 |
EDTA plasma (n=8) | 85-97 | 91 |
Cell culture media (n=8) | 92-105 | 98 |
分别往5个样本中添加已知浓度的目标蛋白,做回收实验,得出回收率范围及平均回收率。将5个样本分别稀释2倍,4倍,8倍,16倍做回收实验,得出回收率范围及平均回收率。
Serum (n=5) | EDTA plasma (n=5) | Cell culture media (n=5) | ||
---|---|---|---|---|
1:2 | Range (%) | 96-101 | 85-92 | 98-105 |
Average (%) | 99 | 90 | 101 | |
1:4 | Range (%) | 85-92 | 95-103 | 86-92 |
Average (%) | 87 | 97 | 90 | |
1:8 | Range (%) | 80-96 | 97-105 | 87-93 |
Average (%) | 81 | 104 | 89 | |
1:16 | Range (%) | 89-101 | 93-102 | 95-103 |
Average (%) | 92 | 101 | 100 |