产品名称 | Rat CD8(Cluster of Differentiation 8) ELISA Kit | 反应种属 | Rat |
Uniprot ID | N/A | 别称 | CD8 |
检测方法 | 双抗体夹心法 | 灵敏度 | 0.75 ng/mL |
标准品 | 80ng/mL | 检测范围 | 1.25-80ng/mL |
样品类型 | Tissue homogenate and Cell lysate;Sample Volume=100μL | ||
检测时间 | 3.5小时 | 研究领域 | Enzyme & Kinase; |
测试原理 | 本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗大鼠CD8抗体包被于酶标板上,实验时样品或标准品中的大鼠CD8会与包被抗体结合,游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗大鼠CD8抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗大鼠CD8抗体与结合在包被抗体上的大鼠CD8结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物,游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB),TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色,加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值,大鼠CD8浓度与OD450值之间呈正比,通过绘制标准曲线计算出样品中大鼠CD8的浓度。 |
由于实验操作条件的不同(如操作者、移液技术、洗板技术和稳定条件等),标准曲线的OD值会有所差异。以下数据和曲线仅供参考,实验者需根据自己的实验建立标准曲线。
(ng/mL) | OD | Corrected |
---|---|---|
80.00 | 2.448 | 2.418 |
40.00 | 1.597 | 1.567 |
20.00 | 0.955 | 0.925 |
10.00 | 0.447 | 0.417 |
5.00 | 0.220 | 0.190 |
2.50 | 0.110 | 0.080 |
1.25 | 0.065 | 0.035 |
0.00 | 0.030 | 0.000 |
板内精密度:低浓度样本,中浓度样本和高浓度样本分别在1块板子上检测20次。
板间精密度:低浓度样本,中浓度样本和高浓度样本分别在3块板子上检测20次。
Intra-assay Precision | Inter-assay Precision | |||||
---|---|---|---|---|---|---|
Sample | 1 | 2 | 3 | 1 | 2 | 3 |
n | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 |
Mean(ng/mL) | 1.86 | 18.74 | 20.96 | 1.81 | 19.10 | 29.66 |
Standard deviation | 0.12 | 0.52 | 1.00 | 0.12 | 0.83 | 2.15 |
C V (%) | 3.02 | 5.15 | 4.81 | 3.34 | 4.09 | 5.35 |
分别往5个不同样本中添加已知浓度的目标蛋白,做回收实验,得出回收率范围和平均回收率。
Sample Type | Range(%) | Average Recovery(%) |
---|---|---|
Serum (n=8) | 80-95 | 87 |
EDTA plasma (n=8) | 87-95 | 91 |
Cell culture media (n=8) | 82-97 | 89 |
分别往5个样本中添加已知浓度的目标蛋白,做回收实验,得出回收率范围及平均回收率。将5个样本分别稀释2倍,4倍,8倍,16倍做回收实验,得出回收率范围及平均回收率。
Serum (n=5) | EDTA plasma (n=5) | Cell culture media (n=5) | ||
---|---|---|---|---|
1:2 | Range (%) | 93-102 | 87-98 | 85-97 |
Average (%) | 97 | 96 | 96 | |
1:4 | Range (%) | 93-106 | 87-98 | 90-99 |
Average (%) | 99 | 87 | 90 | |
1:8 | Range (%) | 87-101 | 83-94 | 82-101 |
Average (%) | 97 | 86 | 94 | |
1:16 | Range (%) | 91-104 | 85-98 | 93-105 |
Average (%) | 99 | 88 | 99 |