产品名称 | Rat TSH(Thyroid Stimulating Hormone) ELISA Kit | 反应种属 | Rat |
Uniprot ID | N/A | 别称 | Thyrotropin |
检测方法 | 双抗体夹心法 | 灵敏度 | 0.75 ng/mL |
标准品 | 80ng/mL | 检测范围 | 1.25-80ng/mL |
样品类型 | Serum, Plasma, Tissue homogenate and Other biological samples;Sample Volume=100μL | ||
检测时间 | 3.5小时 | 研究领域 | Metabolic pathway; |
测试原理 | 本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗大鼠TSH抗体包被于酶标板上,实验时样品或标准品中的大鼠TSH会与包被抗体结合,游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗大鼠TSH抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗大鼠TSH抗体与结合在包被抗体上的大鼠TSH结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物,游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB),TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色,加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值,大鼠TSH浓度与OD450值之间呈正比,通过绘制标准曲线计算出样品中大鼠TSH的浓度。 |
由于实验操作条件的不同(如操作者、移液技术、洗板技术和稳定条件等),标准曲线的OD值会有所差异。以下数据和曲线仅供参考,实验者需根据自己的实验建立标准曲线。
(ng/mL) | OD | Corrected |
---|---|---|
80.00 | 2.472 | 2.418 |
40.00 | 1.621 | 1.567 |
20.00 | 0.979 | 0.925 |
10.00 | 0.471 | 0.417 |
5.00 | 0.244 | 0.190 |
2.50 | 0.134 | 0.080 |
1.25 | 0.089 | 0.035 |
0.00 | 0.054 | 0.000 |
板内精密度:低浓度样本,中浓度样本和高浓度样本分别在1块板子上检测20次。
板间精密度:低浓度样本,中浓度样本和高浓度样本分别在3块板子上检测20次。
Intra-assay Precision | Inter-assay Precision | |||||
---|---|---|---|---|---|---|
Sample | 1 | 2 | 3 | 1 | 2 | 3 |
n | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 |
Mean(ng/mL) | 2.06 | 12.46 | 23.46 | 2.33 | 20.00 | 36.59 |
Standard deviation | 0.11 | 0.92 | 1.65 | 0.12 | 0.58 | 1.69 |
C V (%) | 5.41 | 5.11 | 7.02 | 5.56 | 8.16 | 7.02 |
分别往5个不同样本中添加已知浓度的目标蛋白,做回收实验,得出回收率范围和平均回收率。
Sample Type | Range(%) | Average Recovery(%) |
---|---|---|
Serum (n=8) | 80-92 | 85 |
EDTA plasma (n=8) | 92-105 | 98 |
Cell culture media (n=8) | 85-97 | 91 |
分别往5个样本中添加已知浓度的目标蛋白,做回收实验,得出回收率范围及平均回收率。将5个样本分别稀释2倍,4倍,8倍,16倍做回收实验,得出回收率范围及平均回收率。
Serum (n=5) | EDTA plasma (n=5) | Cell culture media (n=5) | ||
---|---|---|---|---|
1:2 | Range (%) | 85-105 | 86-94 | 85-95 |
Average (%) | 102 | 92 | 87 | |
1:4 | Range (%) | 87-98 | 86-94 | 89-97 |
Average (%) | 94 | 90 | 94 | |
1:8 | Range (%) | 91-102 | 85-95 | 85-94 |
Average (%) | 94 | 86 | 91 | |
1:16 | Range (%) | 86-102 | 89-99 | 80-96 |
Average (%) | 92 | 96 | 80 |