产品名称 | MF-Human IL-4(Interleukin 4) ELISA Kit | 反应种属 | Human |
Uniprot ID | P05112 | 别称 | IL4, BCGF-1, BCGF1, BSF-1, BSF1 |
检测方法 | 双抗体夹心法 | 灵敏度 | 0.94 pg/mL |
标准品 | 100pg/mL | 检测范围 | 1.56-100pg/mL |
样品类型 | 血清,血浆,组织匀浆及其它生物样品;上样量:25μL | ||
检测时间 | 3小时 | 研究领域 | Cardiovascular, Signaling transduction, Cancer, Immunology |
测试原理 | 本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗人IL-4抗体包被于酶标板上,实验时样品或标准品中的人IL-4会与包被抗体以及生物素化的抗人IL-4抗体结合,游离的成分被洗去。然后加入辣根过氧化物酶标记的亲和素,抗人IL-4抗体与结合在包被抗体上的人IL-4结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物,游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB),TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色,加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值,人IL-4浓度与OD450值之间呈正比,通过绘制标准曲线计算出样品中人IL-4的浓度。 |
由于实验操作条件的不同(如操作者、移液技术、洗板技术和稳定条件等),标准曲线的OD值会有所差异。以下数据和曲线仅供参考,实验者需根据自己的实验建立标准曲线。
(pg/mL) | OD | Corrected |
---|---|---|
100.00 | 2.763 | 2.738 |
50.00 | 1.617 | 1.592 |
25.00 | 0.957 | 0.932 |
12.50 | 0.465 | 0.441 |
6.25 | 0.253 | 0.228 |
3.13 | 0.137 | 0.112 |
1.56 | 0.082 | 0.057 |
0.00 | 0.025 | 0.000 |
板内精密度:低浓度样本,中浓度样本和高浓度样本分别在1块板子上检测20次。
板间精密度:低浓度样本,中浓度样本和高浓度样本分别在3块板子上检测20次。
Intra-assay Precision | Inter-assay Precision | |||||
---|---|---|---|---|---|---|
Sample | 1 | 2 | 3 | 1 | 2 | 3 |
n | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 |
Mean(pg/mL) | 45.23 | 415.98 | 612.970 | 49.19 | 359.620 | 510.600 |
Standard deviation | 1.64 | 18.47 | 33.26 | 2.66 | 14.70 | 44.34 |
C V (%) | 4.95 | 7.15 | 5.97 | 7.22 | 3.85 | 4.00 |
分别往5个不同样本中添加已知浓度的目标蛋白,做回收实验,得出回收率范围和平均回收率。
Sample Type | Range(%) | Average Recovery(%) |
---|---|---|
Serum (n=8) | 83-96 | 89 |
EDTA plasma (n=8) | 92-107 | 99 |
Cell culture media (n=8) | 92-105 | 98 |
分别往5个样本中添加已知浓度的目标蛋白,做回收实验,得出回收率范围及平均回收率。将5个样本分别稀释2倍,4倍,8倍,16倍做回收实验,得出回收率范围及平均回收率。
Serum (n=5) | EDTA plasma (n=5) | Cell culture media (n=5) | ||
---|---|---|---|---|
1:2 | Range (%) | 86-97 | 82-96 | 89-97 |
Average (%) | 88 | 86 | 96 | |
1:4 | Range (%) | 93-102 | 82-96 | 85-101 |
Average (%) | 98 | 83 | 98 | |
1:8 | Range (%) | 87-98 | 85-96 | 84-98 |
Average (%) | 91 | 92 | 91 | |
1:16 | Range (%) | 83-97 | 87-101 | 85-93 |
Average (%) | 90 | 100 | 90 |