新闻中心

ELISA实验样本处理及注意事项

血清是检体中最常见样本，如抗体、生化、激素、血药浓度等项目均需要用到血清，然而其质量确实是不可忽视的问题，溶血、脂血、黄疸都会一定程度上影响检测结果

1． 全血采集

量约为要求血清量的2-2.5倍（如：血清要求1ml，需采集全血2-2.5ml）

2. 血清分离

全血存放的容器决定分离的是血清还是血浆；促凝管和空白管存放全血经血液凝固后离心分出的上清是血清；若放入EDTA抗凝管或者肝素抗凝管，离心后分出的上清称为血浆（如图1）

备注：血清主要区别于血浆的是有血液凝固的过程和纤维蛋白的析出

3. 血浆是否可以替代血清进行送检？

多数项目中血浆样本可以替代血清，前提是该检测项目不受抗凝剂成分和凝血因子的影响（如抗体类项目），但生化项目则不可用EDTA抗凝分离血浆，因为EDTA-2K此种抗凝剂不仅可以络合重金属Mg2+，也会致使K+的含量上升，故生化项目的最佳样本是血清

4．什么样的血清样本不合格？

溶血、脂血（乳糜血）、黄疸（若是病理性原因很难消除）属于不合格的样本

5. 血清质量是怎样影响检测的？

1）溶血：红细胞的破裂会引起血浆成分的改变，对一些生化项目如谷草转氨酶、乳酸脱氢酶、钾的测定结果造成较大的影响。若进行抗体类检测本身血清的颜色会干扰到最终的酶标仪读数。

2）脂血：在运用比色法和比浊法检测的项目中，脂血中的乳糜微粒具有散射光的特性不能通过双波长进行消除从而影响检测结果。

3）黄疸：黄疸的血清中含有胆红素，若样本放置时间过长或通过氧化剂后胆红素还可被氧化为胆绿素、胆褐素，这些色素在不同波长范围具有一定的光吸收，从而影响检验结果。

6.组织匀浆：

用预冷的PBS (0.01 M,pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液，称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1: 9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9 mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推 荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂（10mg组织+100微升PBS+10微升蛋白酶抑制剂）)加入玻璃匀浆器中，在冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀 浆液进行超声破碎或反复冻融。最后将匀浆液5000×g离心 5-10分钟，取上清检测。

7.细胞提取液：

贴壁细胞用冷的PBS轻轻清洗，然后用胰蛋白酶消化，1000×g离心5分钟后收集细胞；悬浮细 胞可直接离心收集。收集的细胞用冷的PBS 洗涤3次。每 1×106 个细胞中加入150-200μL PBS重悬并通过反 复冻融使细胞破碎(若含量很低可减少PBS的体积)。将提取液于1500×g离心10分钟，取上清检测。

超声波破碎条件：用20kHz频率，150W的功率，在冰浴中进行超声波破碎，每破碎2s，间隔3s，反复破碎三次。

反复冻融：收集细胞悬液，4℃低温离心（3000rpm，5min），弃上清，加入一定量PBS（200ul），轻轻吹打混匀，-20℃ 冷冻30 min，37℃解冻，如此反复3次，可形成细胞裂解液。