产品名称 | MF-Mouse TNF-α(Tumor Necrosis Factor Alpha) ELISA Kit | 反应种属 | Mouse |
Uniprot ID | P06804 | 别称 | DIF, TNF-alpha, TNFA, TNFSF2,TNF,TNFa |
检测方法 | 双抗体夹心法 | 灵敏度 | 6.56 pg/mL |
标准品 | 700pg/mL | 检测范围 | 10.94-700pg/mL |
样品类型 | 血清,血浆,组织匀浆及其它生物样品;上样量:25μL | ||
检测时间 | 3小时 | 研究领域 | Cardiovascular, Cell biology, Neuroscience, Cancer, Immunology, Metabolism |
测试原理 | 本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗小鼠TNF-α抗体包被于酶标板上,实验时样品或标准品中的小鼠TNF-α会与包被抗体以及生物素化的抗小鼠TNF-α抗体结合,游离的成分被洗去。然后加入辣根过氧化物酶标记的亲和素,抗小鼠TNF-α抗体与结合在包被抗体上的小鼠TNF-α结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物,游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB),TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色,加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值,小鼠TNF-α浓度与OD450值之间呈正比,通过绘制标准曲线计算出样品中小鼠TNF-α的浓度。 |
由于实验操作条件的不同(如操作者、移液技术、洗板技术和稳定条件等),标准曲线的OD值会有所差异。以下数据和曲线仅供参考,实验者需根据自己的实验建立标准曲线。
(pg/mL) | OD | Corrected |
---|---|---|
700.00 | 2.080 | 1.995 |
350.00 | 1.207 | 1.123 |
175.00 | 0.589 | 0.505 |
87.50 | 0.397 | 0.313 |
43.75 | 0.219 | 0.135 |
21.88 | 0.156 | 0.072 |
10.94 | 0.119 | 0.035 |
0.00 | 0.084 | 0.000 |
板内精密度:低浓度样本,中浓度样本和高浓度样本分别在1块板子上检测20次。
板间精密度:低浓度样本,中浓度样本和高浓度样本分别在3块板子上检测20次。
Intra-assay Precision | Inter-assay Precision | |||||
---|---|---|---|---|---|---|
Sample | 1 | 2 | 3 | 1 | 2 | 3 |
n | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 |
Mean(pg/mL) | 7.82 | 107.45 | 129.490 | 12.07 | 71.090 | 186.600 |
Standard deviation | 0.70 | 6.03 | 7.61 | 0.66 | 4.02 | 7.33 |
C V (%) | 3.21 | 6.62 | 3.48 | 2.84 | 5.93 | 3.27 |
分别往5个不同样本中添加已知浓度的目标蛋白,做回收实验,得出回收率范围和平均回收率。
Sample Type | Range(%) | Average Recovery(%) |
---|---|---|
Serum (n=8) | 96-109 | 102 |
EDTA plasma (n=8) | 81-95 | 88 |
Cell culture media (n=8) | 85-97 | 91 |
分别往5个样本中添加已知浓度的目标蛋白,做回收实验,得出回收率范围及平均回收率。将5个样本分别稀释2倍,4倍,8倍,16倍做回收实验,得出回收率范围及平均回收率。
Serum (n=5) | EDTA plasma (n=5) | Cell culture media (n=5) | ||
---|---|---|---|---|
1:2 | Range (%) | 86-97 | 95-102 | 91-102 |
Average (%) | 95 | 101 | 97 | |
1:4 | Range (%) | 83-96 | 95-102 | 89-99 |
Average (%) | 84 | 97 | 92 | |
1:8 | Range (%) | 91-103 | 98-106 | 88-104 |
Average (%) | 103 | 101 | 102 | |
1:16 | Range (%) | 96-105 | 87-98 | 84-98 |
Average (%) | 100 | 90 | 98 |